Browsing by Author "Mazina, Olga"

Now showing 1 - 4 of 4

Determination of biological activity of gonadotropins hCG and FSH by Förster resonance energy transfer based biosensors
(2017) Mazina, Olga; Allikalt, Anni; Tapanainen, Juha S.; Salumets, Andres; Rinken, Ago
Determination of biological activity of gonadotropin hormones is essential in reproductive medicine and pharmaceutical manufacturing of the hormonal preparations. The aim of the study was to adopt a G-protein coupled receptor (GPCR)-mediated signal transduction pathway based assay for quantification of biological activity of gonadotropins. We focussed on studying human chorionic gonadotropin (hCG) and follicle-stimulating hormone (FSH), as these hormones are widely used in clinical practice. Receptor-specific changes in cellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP, second messenger in GPCR signalling) were monitored by a Förster resonance energy transfer (FRET) biosensor protein TEpacVV in living cells upon activation of the relevant gonadotropin receptor. The BacMam gene delivery system was used for biosensor protein expression in target cells. In the developed assay only biologically active hormones initiated GPCR-mediated cellular signalling. High assay sensitivities were achieved for detection of hCG (limit of detection, LOD: 5 pM) and FSH (LOD: 100 pM). Even the small-scale conformational changes caused by thermal inactivation and reducing the biological activity of the hormones were registered. In conclusion, the proposed assay is suitable for quantification of biological activity of gonadotropins and is a good alternative to antibody- and animal-testing-based assays used in pharmaceutical industry and clinical research.
Development and application of the biosensor assay for measurements of cyclic adenosine monophosphate in studies of G protein-coupled receptor signaling
(2015-07-09) Mazina, Olga
Maailma rahvastik on pidevas kasvus ning vananemises ning sellest on tingitud mõnd haigust või sündroomi põdevate patsientide üha suurenev hulk. Enamik haigustest on põhjustatud häiretest organismi metabolismi või rakkude signaaliülekande regulatsioonis. G valguga seotud retseptorid (GPCR) moodustavad suure rakkudevahelist suhtlust reguleeriva valkude perekonna. Keemilise signaaliülekande moduleerimine on levinud ravistrateegia, mida kinnitab ka tõsiasi, et ligi kolmandik kõigist tänapäeva retseptiravimitest on suunatud just GPCR-tele. Ravimid ehk bioaktiivsed ühendid on seega tänapäeva maailma asendamatu osa. Uute sünteetiliste ühendite otsinguil on väga olulisteks uute molekulide testimine ning saadud katsetulemuste võrdlus struktuurselt sarnaste või kehaomaste signaalimolekulide omadustega. See aitab iseloomustada ühendite erinevaid omadusi ning annab väärtuslikku informatsiooni uute ühendite disainiks. Käesolevas doktoritöös arendati välja katsesüsteem erinevate bioloogiliselt aktiivsete molekulide iseloomustamiseks elusates rakkudes. Selleks kasutati fluorestsentsil põhinevat biosensorit. Biosensori kasutamiseks on vajalik selle olemasolu uuritavas objektis (rakud toodavad sensorvalku ise, lähtudes neisse eelnevalt viidud sensori geenijärjestusest). Saavutamaks biosensori ühtlast taset erinevates uuritavates rakkudes kasutati käesolevas töös putukaviiruseid. Inimesele ohutud viirused transpordivad sensorit kodeeriva geenijärjestuse uuritavasse rakku, kus sellest sünteesitakse uus valk, tundlik biosensor. Süsteem võimaldas kasutatava viiruse kogusega reguleerida biosensori taset, mille tulemuseks oli ühtlane ja hea korratavusega valkude tootmine ning usaldusväärne katsesüsteem. Töö käigus demonstreeriti biosensori rakendatavust mitmetes erinevates rakkudes väga erinevate retseptorite aktivatsiooni uurimiseks. Tänu katsesüsteemi tundlikkusele sobib see näiteks ka kehaomaste hormoonide kontsentratsiooni määramiseks erinevates proovides, mis on olulise tähtsusega nii meditsiini kui ka uute tehnoloogiate arendamise seisukohalt. Töö tulemusena on loodud tööriist, mille abil on võimalik määrata erinevate struktuursete omadustega ühendite bioloogilist aktiivsust vastavate retseptorite aktivatsiooni kaudu.
Luteiniseeriva hormooni ja inimese kooriongonadotropiini retseptori aktivatsiooni uurimine LH ja hCG võrdlusena
(Tartu Ülikool, 2015) Luik, Tanel; Mazina, Olga; Tartu Ülikool. Loodus- ja tehnoloogiateaduskond; Tartu Ülikool. Keemia instituut
Tsüklilise adenosiinmonofosfaadi biosensori arendamine
(Tartu Ülikool, 2015) Elp, Rainer; Mazina, Olga; Tartu Ülikool. Loodus- ja tehnoloogiateaduskond; Tartu Ülikool. Keemia instituut