Bifunktsionaalsed streptavidiini teisendid: disain ja ekspressioon E. coli’s

Abstract

Käesolevas bakalaureusetöös disainiti ja toodeti rekombinatseid valke, mis võimaldavad kinnitada märgistatud bioloogilisi märklaudmolekule nii raku membraani kui tuuma ja tsütoplasmasse. Märklaudmolekulide sidumiseks kasutati streptavidiini teisendeid: tetrameere moodustavat streptavidiini ja kimäärset monomeerset streptavidiini. Raku membraani külge kinnituvaks domeeniks valiti bakteriorodopsiini modifitseeritud C-heeliks ning rekombinantse valgu lokaliseerimiseks raku tuuma ja tsütoplasmasse valiti penetratiin. E. coli’s ekspresseerusid C-heeliksist ja kimäärsest monomeersest streptavidiinist koosnev rekombinantne valk ning penetratiinist ja streptavidiinist koosnev rekombinantne valk. Penetratiinist ja streptavidiinist koosnev rekombinantne valk moodustas tetrameere ja sidus biotiini.