Proteiinkinaaside kvantifitseerimine immobiliseeritud ARC-Lum(Fluo) sondidega

Abstract

Käesoleva töö eesmärgiks oli välja töötada aktiivse proteiinkinaasi kontsentratsiooni määramise meetod. Meetod põhineb PKA ja teiste AGC rühma kinaaside suhtes kõrge afiinsusega biotinüleeritud ARC-Lum(Fluo) sondide kasutamisel. Kompleksis sihtmärkvalguga muutuvad ligandi luminestsentsomadused tugevalt, võimaldades aktiivse kinaasi kontsentratsiooni määramist. ARC-Lum(Fluo) sondide pikk eluiga võimaldab aeglahutusega luminestsentssignaali mõõtmist, millega saavutatakse parem signaal-müra suhe ning kõrgem tundlikkus. Välja töötatud meetod on lihtne, kiire, madala reagentide kuluga ja lubab pikomolaarsete kinaasi kontsentratsioonide tuvastamist ja kvantifitseerimist.