Characterization of antigen binding potential of a novel antibody HRP conjugate designed for antibody directed enzyme prodrug treatment of breast cancer cells

Abstract

In English: The aim of this paper is to study the newly designed antibody-conjugate, Trastuzumab-HRP, for binding ability to ErbB2 protein on human breast and lung cancer cell lines using western blotting, immunoprecipitation and immunofluorescence methods. The first part of this bachelor thesis is theoretical and is processed on the basis of the background research. Breast cancer problem, risk factors, general treatment, ADEPT therapy, ErbB2 protein as tumor target antigen, trastuzumab antibody description are included in the first part. The second part of the thesis is specialized and is processed on the basis of the experiments with Trastuzumab-HRP involving breast and non-small cell lung cancer cell lines: AU565, MCF-7, A549, H1299 and H23. This part consists of results of western blotting method, in which trastuzumab was unable to sufficiently detect the ErbB2 protein and the results of alternative method, immunoprecipitation, which showed the capability of trastuzumab to bind to its specific antigen. The immunofluorescence method demonstrated the ability of the novel antibody to recognize and bind to the native form of protein. Eesti keeles: Selle töö eesmärgiks oli testida uudset disainitud antikehakonjugaati, Trastuzumab-HRP, ja selle võimekust seonduma ErbB2 valguga inimese rinnavähi ja kopsuvähi rakuliinides, kasutades selleks western bloti, immuunopretsipitatsiooni ja immufluorestsentsi meetodeid. Selle bakalaureusetöö esimene osa on teoreetiline ja kujutab endast ette taustauuringu tööga seotud teemadest – rinnavähk, selle riskifaktorid ja olemasolevad ravivõimalused, ADEPT teraapia põhimõtted, ErbB2 valk kasvaja antigeenina ja trastuzumab antikeha kirjeldus on käsitletud esimeses osas. Teine osa on pühendatud praktilisele tööle trastuzumab-HRP antikehaga ja inimese rinnavähi rakuliinidega - AU565 ja MCF-7 ja inimese kopsuvähi rakuliinidega - A-549, H1299 ja H23. Selles osas on kirjeldatud tulemused western bloti analüüsist, milles trastuzumab ei olnud võimeline detekteerima oma antigeeni – ErbB2 valku, ja tulemused alternatiivsest meetodist immuunopretsipitatsioonist, mis tõestasid, et trastuzumab-HRP on ikkagi suudab ikkagi detekteerida ja seonduda oma märklauale. Immunofluorestsents meetodi abil sai näidatud, et uus antikeha on võimeline seonduma ka ErbB2 valgu natiivse vormiga elusrakkudel