Bacteroides thetaiotaomicron’i endo-levanaasi lektiinmärgisega valgu puhastamine, biokeemiliste omaduste kindlakstegemine ja immobiliseerimine agaroosmaatriksile

Abstract

Bacteroides thetaiotaomicron (Bt) on üks olulistest inimese jämesooles elavatest bakteritest, mis lagundab paljusid polüsahhariide oligosahhariidideks. Bt ensüüm endo-levanaas BT1760 võimaldab bakteril levaani (fruktoosi polümeeri) kasutada ning tekivad levaani-tüüpi fruktooligosahhariidid (LOS-id), mis on potentsiaalsed prebiootikumid. Ensüümide immobilisatsioon kandjale võimaldab selle korduvkasutust ja suurendab produkti hulka. Käesolevas bakalaureusetöös kasutati agaroos-seonduva lektiinimärgisega (LSLt) BT1760 ühendvalku. Töö eesmärgiks oli kindlaks teha LSLt-BT1760 biokeemilised omadused ja hinnata magnetilisele agaroosmaatriksile immobiliseeritud LSLt-BT1760 korduvkasutamise võimalust levaanist LOS-ide tootmiseks. Tulemused näitasid, et LSLt lisamine ei mõjuta oluliselt BT1760 ensümaatilist aktiivsust ega kineetilisi parameetreid, kuid tõstab mõnevõrra temperatuuristabiilsust. LSLt-BT1760 magnetilisele agaroosaatriksile seondumine on piisavalt stabiilne, et tsüklite vältel on võimalik kasutada seda katalüüsijat LOS-ide tootmiseks.