23S rRNA domeeni 0 mutatsioonide mõju E. coli kasvule ja ribosoomide biogeneesile

Abstract

Ribosoom on molekulaarne masin, mille ülesandeks on valgu biosüntees. Bakteriaalne ribosoom koosneb väiksest ja suurest alaühikust, mille ülesanneteks on vastavalt mRNA dekodeerimine ja peptiidsideme katalüüs. Käesolev uurimustöö keskendub bakteriaalse ribosoomi suure alaühiku koosseisus oleva 23S rRNA tsentraalsele regioonile (nimetatakse domeen 0) ning täpsemalt selle heeliksile 72. Töö eesmärgiks oli teada saada, kuidas mõjutavad domeeni 0 heeliks 72 nukleotiidid E. coli kasvu ja ribosoomi biogeneesi. Selleks sisestati bakterisse E. coli 23S rRNA H72 punktmutatsioone sisaldavaid vektorplasmiide ning jälgiti konstrueeritud tüve kasvu ning ribosomaalsete alaühikute jaotumist sahharoosigradiendis. Töö tulemustest selgub, et ühegi 23S rRNA variandi ekspresseerimine ei põhjusta muutusi bakterirakkude generatsiooniajas. G2027A ja C2025U mutatsioonid põhjustavad ribosoomi biogeneesi defekti, mis väljendub ribosomaalsete partiklite gradiendiprofiilides, viidates H72 järjestuse olulisusele ribosoomide korrektse biogeneesi toimumiseks.