Glutamiini süntetaasi geeni väljalülitamine hiina hamstri (Cricetulus griseus) munasarja rakuliinis

Abstract

Hiina hamstri munasarja (CHO) rakke kasutatakse paljude terapeutiliste valkude tootmises. Tõhusa tootmisprotsessi tagamise suurim väljakutse on super-produtsent rakuliinide isoleerimine heterogeensest populatsioonist, kus leidub nii kõrge kui ka madala tootlikkusega rakke. Algne glutamiini süntetaasil baseeruv selektsioon põhineb GS transgeeni kasutamisel selektsioonimarkerina koos GS inhibiitoriga metioniin sulfoksimiin (MSX). Kirjanduse andmetel võivad endogeenset GS-i ekspresseerivad rakud omandada tolerantsuse MSX-i suhtes, mis pärsib selektsioonisüsteemi tõhusust kõrge tootlikkusega rakuliinide saamiseks. Endogeenset GS-i ekspresseeriva geeni väljalülitamine CHO rakuliinis aitab muuta superprodutsent rakkude valimise efektiivsemaks, kuna selektsioonis jäävad ellu ainult rakud, milles selektsioonimarker GS koos huvipakkuva järjestusega on integreerunud aktiivselt transkribeeritavasse lookusesse. Käesoleva bakalaureusetöö eesmärk on luua välja lülitatud glutamiini süntetaasi geeniga CHO rakuliin, mis oleks sobiv edasiseks stabiilsete superprodutsent rakuliinide arendamiseks